Der Experimentator Molekularbiologie/Genomics by Cornel Mülhardt PDF

By Cornel Mülhardt

ISBN-10: 3642346359

ISBN-13: 9783642346354

ISBN-10: 3642346367

ISBN-13: 9783642346361

Dieses Buch enthält das Grundlagenwissen sowie Tipps und tips für den Umgang mit Nucleinsäuren. Der Autor kennt Lust und Frust der täglichen Laborroutine ganz genau.

  • Präparieren, Fällen, Konzentrieren und Reinigen von Nucleinsäuren
  • Restriktionsenzyme, Gele, Blotten
  • Polymerase-Kettenreaktion
  • RNA-Isolierung, -Transkription
  • Klonierung von DNA-Fragmenten
  • Markierung von Sonden, Hybridisierung, Screening, Sequenzierung
  • Mutagenese, In-vitro-Translation, transgene Mäuse, Transgenexpression, Gentherapie, Genomik

Dieses Buch richtet sich an alle Experimentatoren, die molekularbiologische Versuche durchführen wollen und gern nachvollziehen möchten, used to be sich in ihrem Reaktionsgefäß abspielt. Das ganze Spektrum der üblichen molekularbiologischen Methoden wird vorgestellt, kommentiert und Alternativen aufgezeigt.

Der lockere Ton wendet sich gleichermaßen an Studenten wie an BTAs und Laboranten, aber auch der alte Hase wird hier und dort noch etwas Neues entdecken. Die 7. Auflage wurde überarbeitet und aktualisiert.

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Polystyrol und Polycarbonat beispielsweise, zwei wegen ihrer Durchsichtigkeit beliebte Materialien, lösen sich (bösartigerweise relativ langsam) auf und brechen dann während der Zentrifugation. Das Beseitigen des stinkenden, ätzenden Drecks aus Rotor und Zentrifuge gehört zu den nachhaltigsten Eindrücken im Leben eines Experimentators. Tipps Das Protokoll lässt sich vereinfachen, indem man den ersten Schritt, die Reinigung mit Phenol, wegfallen lässt. Auch der Isoamylalkohol ist erlässlich; offenbar verhindert er die Bildung von Schaum an der Oberfläche, was allerdings ein eher seltenes Phänomen ist, eine 1 : 1 Phenol-Chloroform-Mischung tut daher den gleichen Dienst.

Die Lymphocyten sammeln sich an der Grenzschicht zwischen Blutplasma und Ficoll und können mit einer Pasteurpipette abgenommen werden, während die Erythrocyten am Becherboden sedimentieren. Tipps Sorgfältig durchgeführt, erhält man mit dieser Methode DNA-Fragmente von ca. 50–100 kb Länge. Wer Wert auf möglichst lange DNA-Fragmente legt, sollte nach der Phenol-Chloroform-Reinigung statt einer Ethanolfällung eine Dialyse durchführen (7 Abschn. 6). Dabei wird mindestens zweimal für insgesamt wenigstens 24 h gegen ein hundertfaches Volumen TE-Lösung dialysiert.

Besonders im Bereich der Proteinreinigung lässt sich diese Technik gut nutzen, weil dort die Affinitätschromatographie eine etablierte Methode ist, man denke nur an die Aufreinigung von Proteinen mit His-tag mittels Nickel-Chelat-Säulen; dies lässt sich in der Variante mit magnetischen Agarosekügelchen sehr gut im kleinen Maßstab durchführen. Auch im Nucleinsäure-Bereich findet die Technik schon länger Verwendung, z. B. 3 Die Reinigung von Nucleinsäuren Biotin-markierten cDNAs mittels Streptavidingekoppelten Kügelchen.

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by John
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